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用分光光度法粗测金黄色葡萄球菌菌悬液的浓度
发布时间:2016-06-12 点击次数:2892次

 用分光光度法粗测金黄色葡萄球菌菌悬液的浓度

实验目的:

    通过对同一菌液同时测吸光度值与平板菌落计数,将两个结果做标准曲线。标准曲线做出后,通过测吸光度值间接反应菌悬液的浓度,用于指导菌悬液的制备。

实验设备:可见分光光度计

波长为600nm

实验材料:空白对照液:0.9%无菌氯化钠溶液

      稀释液:0.9%无菌氯化钠溶液

      营养肉汤培养基

实验菌种:金黄色葡萄球菌(新鲜培养物)

实验步骤:

1.将金黄色葡萄球菌的新鲜培养物接种至营养肉汤培养基中,在30~35℃恒温培养箱中培养18~24h。

2. 在无菌阳性室按无菌操作将培养后的金黄色葡萄球菌用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成不同浓度的菌悬液 。具体为分别吸取营养肉汤培养液0.1ml,0.2ml,0.3ml,0.4ml,0.5ml0.6ml0.7ml10ml 0.9%无菌氯化钠溶液中,稀释成7种不同浓度的原始菌悬液。序号分别为1-7号。

2.1平板菌落计数法测活菌浓度

14个营养琼脂培养基平板,分别从每个原始菌液中,取0.2ml的菌悬液,用平板涂布法,涂于平板中,标明序号,每个稀释度涂2块平板. 37培养箱培养72 h后,可见菌落形成,选取菌落数在30~300间的平板进行计数,每组稀释度相同的平板取平均值作为菌落数计算出原菌液细菌浓度,作为细菌菌液的标准浓度。

2.2分光光度法测菌悬液吸收值

同时将以上5种原始菌液在波长为600nm下测定吸光度。用0.9%无菌氯化钠溶液作为空白对照,记录各原始菌液的吸光度值。

表一:平板菌落计数与吸光度值对比记录

序号

吸取原培养液的量(ml---原始菌液

加样到平板上的量(ml

稀释倍数

 

平板计数菌落数(cfu

 

吸光度值

原始菌液的含菌量(cfu

1

0.1

0.2

5

 

 

0.018

 

2

0.2

0.2

5

 

 

0.029

 

3

0.3

0.2

5

 

 

0.049

 

4

0.4

0.2

5

 

 

0.058

 

5

0.5

0.2

5

 

 

0.076

 

6

0.6

0.2

5

 

 

0.082

 

7

0.7

0.2

5

 

 

0.102

 

结果计算

_2Y-^U ?

Ey­eiy{ ]9|Y8n'a5oa对同一菌液同时测吸光度值与进行平板菌落计数,将平板菌落计数所得菌液浓度作为细菌标准浓度c. 根据所测出A值以及相对应的标准浓度c值,作出标准曲线。

 

 


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